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  • dafabet黄金手机版蛋白表达是否可以提供质粒?如果可以,提供的量是多少?

    A:一般不提供质粒,如需要提供通用质粒,一般为10 ug左右。

  • 筛选到的序列会进行哪些分析和排查?交付抗体之间的差异为多少定义为unique的序列?

    A:筛选到的分子序列一般会进行测序分析,天然库筛选出来的序列差异性很大,一般CDR3序列之间相差3个及以上氨基酸定义为unique。

  • 筛完库最终提供什么package的分子?

    A:结合能力,交叉活性;要看抗原提供的类型,若初始提供的就是人、鼠、猴的抗原,在拿到binder后也会验证分子的交叉活性;若初始提供的是单一种属的抗原则只验证结合能力。

  • 我们一共有几个库?一般倾向于用哪一个?不同子库有什么差别?

    A:现阶段有4个库,四种不同germline构建的4种库,常用的是A库,是基于前期的实验验证,A库筛到的分子数量会多一些。

  • 筛到的初筛binder亲和力大概有多少?

    A:由于binder/phage与antibody在亲和力上有一定的差别,在完成全长抗体构建前,在初筛阶段我们只拿到足够数量的binders,对亲和力并没有很明确的要求。基于我们的一般经验,全长抗体的亲和力成正态分布,最高可以达到pM级左右。

  • 候选分子使用噬菌体展示库筛选,同一个靶点会不会给出重复序列?

    A:不会,因为最终交付的是满足数量要求、序列独特的分子。

  • dafabet黄金手机版的羊驼免疫库,天然库,人源重组抗体库,小鼠免疫库筛选到的分子的亲和力怎么样?

    A:天然库由于没有经过免疫而缺少体内筛选的过程,所以由天然库筛选出的抗体亲和力要比免疫库筛选出的抗体低一些,但数量会多很多。基于我们的经验,天然库筛选出的binder在构建全长抗体后,亲和力呈正态分布,最高可以达到pM级别。

  • 人源化重组抗体库筛选交付,细胞和蛋白的交付标准分别是什么?

    A:1) 满足客户需求的binder数量;2) 30-50ug Fab小样;3)噬菌体展示抗体库筛选报告。

  • 天然库筛库交付的分子的标准是什么?

    A:天然库筛选出来的序列差异性很大,一般CDR3序列之间相差3个及以上氨基酸定义为unique;交付标准包括binder的数量,一般不包括亲和力。

  • 怎样同时保证有文库筛选到的blocking效应的分子同时也是亲和力达到nM级别以上的?

    A:在抗体筛选阶段应该是无法保证blocking活性的,但在binder或phage水平上,可以进行binding活性验证来进行简单的筛选,亲和力大小要在构建全长后才能确定。

  • 人源化重组抗体库筛选时,使用抗原、细胞株筛选有什么不同?

    A:抗原筛选一般通过ELISA的方式进行筛选,一般用于分泌型蛋白或跨膜蛋白的胞外区;细胞筛选则使用FACS的方式进行筛选,并且用不表达抗原蛋白的空细胞做负筛,一般用于为多次跨膜蛋白或天然构象与人为表达构象不同的蛋白。

  • 关于抗体工程改造,第一轮可以提升5-20倍,那第二轮可以提升多少?

    A:每一轮改造基本上都是在5-20倍,但第一轮达标后就不会做第二轮了,改造的具体倍数也是case by case。