菜单
技术背景

单域抗体通常只由重链抗体的可变区共110-130 个氨基酸组成, 分子量仅有12–15 kDa, 但却具备与传统抗体相似或更高的特异性抗原亲和力。此外,单域抗体理化特征稳定、亲和力高、易于重组表达制备、易人源化、易于与其它靶点抗体组合等特点使其备受关注。经过20多年的研究,单域抗体已经逐步应用于免疫研究、诊断检测、医学和生物学成像、治疗性抗体开发等各个领域。


基于单域抗体的以上优势,dafabe888手机版登录构建了单域抗体库平台。


截至目前,dafabe888手机版登录构建的超千亿单域抗体库 (Sanyou sub-Trillion Single Domain Antibody Library,ST-SDAL) ,包括羊驼天然库、羊驼免疫库和羊驼半合成库,拥有独立知识产权,库容高达1.6x1011。所获抗体亲和力高达pM;液相高通量筛选,每个靶点平均交付30-100个先导抗体分子;高难度靶点、隐蔽表位全覆盖。ST-SDAL 自发布以来已经过数十个靶点的验证。


服务亮点
  • 羊驼天然库
    1. 收集超过200 例羊驼PBMC; 
    2. 库容近1011 cfu;
    3. 平均可筛选到50-100先导抗体分子;
    4. 可用于高难度及隐蔽性靶点;
    5. 亲和力达到pM;
    6. 筛选周期短,3-6周即可交付。
  • 羊驼免疫库
    1. 超全引物设计;
    2. 单个项目库容达5x108 cfu; 
    3. 亲和力达到 pM; 
    4. 可用于特异性抗体开发。
  • 羊驼半合成库
    1. 采用国际先进的Trim 引物技术; 
    2. 库容达1.35x1011 cfu; 
    3. 采用最高成药性骨架区设计; 
    4. 基于大数据分析,融合千亿级天然库CDR。

服务内容
服务名称 客户提供 交付物 交付周期
单域抗体筛选服务 靶点名称、或靶点抗原、或细胞株 >30个先导抗体分子 6-8周(羊驼天然库)
4个月(羊驼免疫库)

单域抗体PCC分子

发现服务

靶点名称、或靶点抗原、或细胞株

1-2个在动物模型水

平优异的人源化抗体

7-8个月

案例展示

1.先导抗体数量

通过dafabet黄金手机版超千亿单域抗体库筛选获得的纳米抗体先导分子数量多。通过10个靶点对 ST-SDAL进行验证,共获得475个具有独特序列的抗体克隆,克隆数中值为38个。

Fig. 1 Statistics of Binder amount/project


2.先导抗体亲和力分析

通过dafabet黄金手机版超千亿单域抗体库筛选获得的纳米抗体候选分子亲和力高,可达pM水平。对所得单域抗体克隆构建全长IgG 后的亲和力测定情况如下所示。 Fig. 2 和Fig. 3 中的抗体来自两个不同的项目,由图可知,这两个项目均可获得多个亲和力与对照抗体相当或显著优于对照抗体的分子。


Fig. 2 Affinity ranking assay of SD10


Fig. 3 Affinity ranking assay of SD41


3. 细胞水平结合、阻断活性分析

通过dafabet黄金手机版超千亿单域抗体库筛选获得的纳米抗体候选分子大多具有细胞水平结合活性和阻断活性。Fig. 4 展示了采用FACS 分析抗体与细胞表面蛋白结合活性的一个案例项目,Fig. 5 展示了使用FACS 分析抗体对受体配体结合的阻断活性的一个案例项目。由图可知,全部先导抗体分子均展现了良好的细胞水平的结合活性;6 个抗体中,有4 个抗体展现了优于对照抗体的阻断活性。


Fig. 4 Binding affinity determination by FACS


Fig. 5 Blocking activity determination by FACS


4. 体外药效验证

通过dafabet黄金手机版超千亿单域抗体库筛选获得的纳米抗体候选分子体外药效优秀,甚至优于对照抗体。MLR实验中,使用不同donor 的CD4+T细胞及DC细胞共培养,抗PD-L1的抗体可有效阻断PD1/PD-L1 抑制信号,活化T细胞,促进细胞因子的分泌。如图Fig. 6所示,经PD-L1候选抗体 (A1, A2) 处理后,细胞的IL-2分泌量均显著增加,表明两者具有与已上市的对照抗体药物高度相似的生物学活性。



Fig. 6 In vitro evaluation of SD10 sdAb candidates by MLR


5.体内药效验证

通过dafabet黄金手机版超千亿单域抗体库筛选获得的纳米抗体候选分子体内药效优秀,甚至优于对照抗体。 候选分子在SCID 小鼠CDX 模型的体内抗肿瘤药效验证案例如Fig.7 所示。在SCID小鼠皮下接种CLDN18.2过表达HEK293细胞,接种8天后开始进行药物治疗,治疗方式为静脉注射和腹膜内注射两种方式交替给药,每周两次,连续给药三周。结果显示候选抗体(C2)在5MPK剂量时显示出了极其优异的抗肿瘤效果。


Fig. 7 Tumor growth inhibition

附加服务
子服务1:骆驼、羊驼免疫服务
dafabe888手机版登录公司核心研发团队成员拥有多年的抗体定制生产经验,由客户提供抗原(细胞)或抗原序列,dafabet黄金手机版帮助完成驼类免疫服务,满足了客户多种品系、多种免疫方案、多种免疫途径的各类要求。公司建有设有羊驼和骆驼饲养基地。目前有几十只健康适龄、免疫背景清晰的羊驼和骆驼,并配备了专业的、创新的免疫服务平台。
子服务2:纳米抗体库构建服务

纳米抗体库构建服务是通过客户提供免疫后的驼类动物血清,构建高质量的驼源VHH抗体噬菌体展示文库,从而获得高质量的纳米抗体。经过免疫驼科淋巴细胞的体细胞成熟将使抗体库对特定抗原具有更高的特异性,因此不需要很大的库容量。在建库的过程中分离RNA,并通过随机引物反转录得到cDNA,再通过数十组引物,扩增出所有抗体基因,然后将纳米抗体基因插入噬菌体展示载体,构建出高质量的单域抗体库。


抗体库高质控标准:

名称 标准 名称 标准
空载体比例 <10% 酶切位点完整率 >90%
正确抗体表达率
>80% 终止子比例
<10%
独特序列占比
<10%
载体污染


子服务3:纳米抗体库筛选服务

纳米抗体库筛选服务是指由客户提供构建好的纳米抗体库,依托dafabet黄金手机版的高通量自动化筛选工作站,结合抗原、多肽、全细胞等多种筛选策略,进行纳米抗体库的高效筛选,通过预初筛来确定每一个输出集合的阳性率和Unique率,最后通过大量初筛和亲和力排序来筛选阳性克隆并评价其EC50值及最高OD450值,从而获得针对某一靶点的特异性抗体。


抗体库构建及筛选过程


案例展示

1. 羊驼免疫后血清学效价高

Fig. 8 展示的是免疫后羊驼血清学效价的数据。如图所示,该项目2只羊驼 (A,B) 免疫后的 IgG 血清学效价约为256k,达到建库标准,甚至为理论效价指标的8倍。


Fig. 8 Serological titer assay of alpaca after immunization


2. 纳米抗体库建库质控标准高

Table 1 展示的是dafabet黄金手机版纳米抗体库构建质控理论指标和某单域库实际质控参数。如Table 1所示,8种质控参数均优秀达标,具有免疫效价高,库容大,空载体占比、终止子占比极低,抗体正确表达率和独特序列克隆率近100%的特点。



Table 1 Actual indexes of a project 



服务内容

服务名称 服务内容 客户提供 交付物及标准 周期
驼科动物免疫服务 骆驼或羊驼免疫 抗原或抗原序列 免疫合格的动物PBMC 8周
纳米抗体库构建服务
噬菌体展示库构建 外周血
符合交付标准的免疫库 2周
纳米抗体库筛选服务
筛选纳米抗体
抗原或细胞株
>30 个先导抗体分子
3-5周