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技术背景

体外诊断(IVD,In Vitro Diagnosis)是指在人体之外,通过对人体样本(血液、体液、组织等)进行检测而获取临床诊断信息,抗体是最常用的体外诊断试剂之一。截至2020年,全球体外诊断市场已达747亿美元。随着全球化医药领域的发展,精准诊断和精准医疗已成为重要趋势。


dafabe888手机版登录是一家国际领先的、专注于创新抗体药物研发和服务的生物高技术企业,打造了从载体构建到小试工艺开发整个一体化的平台。为了满足全球范围内企业对体外诊断和检测试剂及原材料的需求,加速中国诊断市场原材料的自给率,dafabet黄金手机版推出体外诊断及检测抗体整体解决方案:为客户提供诊断抗体、检测抗体原材料制备及试剂盒开发等一站式流程服务。


服务亮点
  • 蛋白表达服务
    1. 拥有完整的蛋白表达,蛋白发酵,蛋白小试与中试规模的工艺技术支持。严格的GMP规则和QC质量控制体系。
  • 抗体筛选服务
    1. 拥有万亿级噬菌体展示抗体库,有全人抗体、羊驼单域抗体、鼠源抗体多种抗体产生途径,可解决客户的不同需求。
  • 一站式解决方案
    1. 提供从靶点到抗体以及平台适配性的阶段性和整体性解决方案,可针对不同客户订制化服务。
  • 高质量原材料生产及质控
    1. 拥有ELISA、IHC、WB、FACS多种检测手段,表达细胞株活率、表达量高,生产和质控标准严格。

服务特性
1.多样化的抗体产生

dafabe888手机版登录拥有50人抗体海选、筛选专业化团队;拥有经验丰富的噬菌体展示技术、高通量自动化仪器和免洗ELISA等多种最新技术的综合性平台。dafabe888手机版登录已建立了免疫管包被抗原筛选法、磁珠偶联抗原筛选法、细胞基础上的抗体筛选法等多种抗体海选方法。可根据靶点特性选择合适的抗体海选方法。


2.一站式解决方案

dafabe888手机版登录经过6年的抗体和蛋白研发历程,建立了成熟的蛋白表达、纯化、抗体纯化筛选、抗体极致改造、体内外药效检测等平台,基于这些成熟的平台,可提供伴随诊断抗体阶段性和整体性一站式解决方案。


3.高质量原材料生产及质控

dafabe888手机版登录蛋白制备平台从载体构建、细胞株构建开始,历经5 年发展,形成了以真核细胞表达为核心,包括质粒、蛋白、细胞株等各种原材料制备。


质控体系:

1、高表达细胞株:多种高表达细胞株可供选择,包括:Thermo授权的Freedom CHO-S, Horizon授权的HD-BioP3 Null CHO K1 与QuaCell授权的CHO-K1Q。

2、多重筛选体系:基于板式反应器、管式反应器、摇瓶、发酵罐等多重筛选体。 

3、高产:表达量≥6 g/L。 

4、稳定:2轮稳定性评估确保高稳定性。

5、两轮稳定性评估包括早期稳定性评估和正式稳定性评估,确保所选细胞株的高稳定性。


6、17项细胞库检定指标,11项表达产物质控指标,9项细胞稳定性检测指标,以上检测结果综合指导克隆筛选,获得高质量细胞株。 

7、合规:cGMP标准;种子细胞符合cGMP规范。 

8、各项文档记录清晰可追溯,确保种子细胞来源清晰、细胞株传代记录清晰、细胞库构建及检定记录清晰。 

9、细胞株的单克隆源性符合法规要求,影像资料完整。 

10、细胞库构建符合cGMP标准。


11、快速:获得稳定高产单克隆细胞株仅需约3.5个月。

12、约3.5个月时间即可获得稳定高产的可用于治疗产品开发的生产用单克隆细胞株。




Fig.1 先进的生产仪器:板式反应器、管式反应器、摇瓶、发酵罐、GE AKTA pure等


服务内容
服务名称
服务内容
客户提供
交付物及标准
周期
全人天然库筛选

1)靶点抗原活性验证

2)抗体筛选

3)抗体功能验证

靶点名称、或靶点抗原、

或细胞株

5-10个验证抗体分子
6-8周
动物免疫库筛选

1)靶点抗原活性验证

2)动物免疫

3)免疫库构建

4)抗体筛选

5)抗体功能验证

靶点名称、或靶点抗原、

或细胞株

5-10个验证抗体分子
4个月


案例展示
诊断及检测抗体筛选结果评估

1.先导抗体数量

dafabe888手机版登录共有3种不同类型的抗体库,库容均在1E+11以上。通过对上百个靶点在不同的抗体库筛选分子数量进行统计,全人源天然库(NL)平均获得100-300个具有独特序列的抗体克隆,小鼠免疫库(MIL)平均获得50-100个具有独特序列的抗体克隆,羊驼库(SDAL)平均获得50-100个具有独特序列的抗体克隆。


2.先导抗体亲和力、表位分组分

通过对nCOV的靶点进行全人源天然库的筛选,对所得抗体克隆构建全长IgG 后的亲和力及表位分析情况如下所示。 由Fig. 2可知,该项目获得了多个亲和力与对照抗体相当或显著优于对照抗体的分子,抗体亲和力均能达到nM水平。由Fig. 3可知,该项目获得了3组不同表位的候选抗体。


Fig. 2 Affinity ranking assay of SD10


Fig. 3 Affinity ranking assay of SD41


3. 应用场景

dafabe888手机版登录筛选获得的诊断类抗体,特异性强、灵敏度高,应用范围非常广泛,可应用于体内及体外多种诊断、检测、监控方式。Fig. 4 展示了诊断抗体可用于胶体金试剂盒的示意图,Fig. 5 展示了诊断抗体可用于伴随诊断的示意图。


Fig. 4 Gold immunochromatographicassay



Fig. 5 IHC assay

诊断及检测抗体生产表达情况评估

1. SDS-PAGE

SDS-PAGE 能准确确定分子量大小及主条带纯度,达到纯度分析的目的。


2. SEC

如图2所示,SEC 能准确分离出样品A 的聚体含量2.72%,单体含量 97.28%, 达到聚体分析的目的,为抗体蛋白纯度鉴定提供精准的数据支持。


3. 细胞产量、活率

Top clone细胞株接种到培养基中进行摇瓶Fed-batch培养,定期取样,检测活细胞密度、细胞活率、表达量以细胞株活细胞密度最高可到20.8 ×106 cells/mL,培养15 天后,细胞活率仍可维持在78%,抗体表达量可达6 g /L。


附加服务
骆驼、羊驼免疫服务

标志物类抗体筛选主要是用于抗人肿瘤标志物、癌胚抗原类、激素类、 糖蛋白类、癌基因类和细胞表面肿瘤抗原类诊断抗体的筛选。dafabe888手机版登录根据诊断抗体的检测手段,个性化定制抗体库构建及抗体筛选服务,8-10周就可以交付经过验证的抗体蛋白。


服务流程


服务案例

新冠检测抗体和RBD突变抗原,如下图所示,全人源抗体库筛选出抗体1/2,对SARS-COV-2高频突变位点有较好的亲和力。


Fig.6 Binder amount/project


Fig.7 Binder amount/project


服务内容

服务名称
服务内容
客户提供
交付物及标准
周期
全人天然库筛选

1)靶点抗原活性验证

2)抗体筛选

3)抗体功能验证

靶点名称、或靶点抗原、

或细胞株

5-10个验证抗体分子
6-8周
动物免疫库筛选

1)靶点抗原活性验证

2)动物免疫

3)免疫库构建

4)抗体筛选

5)抗体功能验证

靶点名称、或靶点抗原、

或细胞株

5-10个验证抗体分子
4个月