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技术背景
抗体药物从PCC到IND涉及到多个环节,需要包括细胞系开发、小试上/下游工艺开发、制剂开发、中试生产、药理/毒理、QC、QA、注册申报等多平台、多部门的通力合作。对于大多数初创型药企来说,建立和管理专业化的团队是不小的挑战,并且团队的磨合、经验的积累都需要大量的时间。除此之外,从PCC到IND仍需面临诸多挑战。包括能否获得先发优势,抢占市场;抗体表达量、纯化回收率、生产成本在同类型产品中是否具有竞争优势;生产设施、质量体系是否符合GMP要求;如何降低过程中可能的失败风险等等。

服务概括

dafabe888手机版登录致力于为全球客户提供从PCC到IND的整体解决方案,拥有多个中美双报项目从PCC到IND的实战经验,其中1个项目已经获批临床。您只需提供给我们PCC分子,12-14个月后我们返还给您符合药品注册申报要求的临床样品和IND Package,彻底解决您的后顾之忧。


我们的整体解决方案还可以细分为一系列子服务,包括细胞株构建、细胞株建库、小试发酵、小试纯化、制剂工艺开发、质量研究、成药性分析、蛋白稳定性研究、临床样品生产等。您可以选择整体打包,也可以根据实际情况选择从任一阶段启动,在任一阶段停止。


服务亮点
  • 快速:高通量,整体统筹,无缝衔接
    1. 3.5个月获得高表达稳定细胞株,3-4个月完成小试工艺开发;
    2. 平台每年可完成120个细胞株构建,120个MCB构建和40个WCB构建
    3. 经验丰富的项目管理团队进行整体统筹,平台间无缝衔接,从DNA到IND仅需12-14个月。
  • 灵活:自由选择,随启随停
    1. 可选择从PCC至IND任一节点开始,根据项目进展情况选择在任一节点结束,给客户以低风险、低成本、快速的优质体验。
  • 高产量:抗体表达量可达到8-10 g/L,下游整体回收率60%-80%
    1. 采用GS高表达筛选系统, 多种高表达细胞株可供选择
    2. 进行板式反应器、管式反应器、摇瓶、发酵罐等多重筛选体系。
  • 高质量:系统全面的表达产物质控及成药性评估
    1. 不同时期表达产物的全面检测,11项指标
    2. 两轮细胞株稳定性评估,9项指标
    3. 全面细胞库检定,17项指标。
  • 合规:符合NMPA, FDA, EMA申报要求
    1. 3种来源清晰的获官方授权的宿主细胞
    2. 细胞株的单克隆性符合法规要求
    3. MCB、WCB构建符合cGMP标准
    4. 临床样品生产符合cGMP标准。
  • 经验丰富
    1. 团队拥有十余个项目的临床前研发及IND申报经验。

服务特性

1、生产细胞株构建

· 3种官方授权的高表达细胞株可供选择

· 2轮细胞株稳定性评估,细胞株稳定性好 

· 细胞株的单克隆源性符合法规要求。


2、小试发酵工艺开发 

· 高表达量

· 高品质表达产物 

· 高质量评价体系。 


3、小试纯化工艺开发 

· 高通量;

 · 高回收率,高纯度

 · 产品和工艺相关杂质符合法规要求。


4、制剂工艺开发 

· 质量高:全面多维度的考察指标,保证更高的项目成功率 

· 合规:检测指标及方法符合最新法规要求 

· 时间快:成熟的模块化平台,多个检测指标同步推进,稳定快速。


5、质量研究 

· 分析手段全面多样 

· 全面质量管理体系 

· 国际先进的仪器设备。 


6、蛋白稳定性研究 

· 专业,全面的方案设计 

· 专业,稳定,高效的分析方法 

· 完善的样品管理体系。 


7、抗体成药性分析 

· 全面评估体内外药效

 · 探索药物制剂稳定性。


案例展示

1. Top pools的24深孔板筛选

挑选48个表达量较高的pool细胞株进入24深孔板,进行8-12天的Fed-batch培养,每48小时取样,检测细胞 活率和密度,培养结束检测抗体表达量,并根据表达量和活细胞密度积分值计算Qp值。筛选结果如Fig. 1所示,多个pool细胞株在24深孔板中表达量达到2.5 g/L以上,Qp达到30 pg/cell/day以上。 


Fig. 1 Pool细胞株在24深孔板中的表达量(Titer)与Qp


2. 单克隆细胞株摇瓶Fed-batch培养

单克隆细胞株接种到培养基中进行摇瓶Fed-batch培养,定期取样,检测活细胞密度、细胞活率、表达量以及乳酸、铵等代谢数据,检测结果如Fig. 2所示。细胞株活细胞密度最高可到15.9×106 cells/mL,培养19天后,细胞活率仍可维 持在81.6%,抗体表达量可达8.8 g/L,乳酸和铵离子始终维持在相对较低水平(乳酸<2 g/L,铵离子<10 mM)。

Fig. 2 单克隆细胞株摇瓶Fed-batch培养 

 (A:表达量; B:细胞活率;C:活细胞密度;D:乳酸;E:铵)



3、某单抗项目培养基筛选试验

细胞株分别接种到不同的商业化培养基中进行Fed-batch培养,定期取样,检测细胞活率和密度,以及乳酸、 铵等代谢数据,Protein A-HPLC检测抗体表达量。作图如下,细胞株在大部分培养基中生长良好,活细胞密度 最高可到20-25 (× 106 cells/mL),培养15天细胞活率仍然可维持在70-80%之间,抗体表达量达到6-7 g/L,乳酸和铵 离子维持在相对较低水平(乳酸<2 g/L,铵离子<10 mM)。


Fig. 3 某单抗项目培养基筛选试验


4、某双抗项目单克隆细胞株反应器Fed-batch培养

该细胞株在3 L反应器上的双抗表达量为6 g/L。同时Peak VCD为16.6×106 cells/ml,培养到第17天细胞活 率仍然可以维持在80%左右。铵离子浓度有一定上升,但仍然处于较低水平(<10 mM),不会对细胞生长和抗体 表达产生明显抑制作用。乳酸浓度始终低于3 g/L,PCO2始终低于120 mmHg。


Fig. 4 某双抗项目单克隆细胞株生物反应器Fed-batch培养试验


5、某双抗项目质量分析数据

5.1 亲和活性分析

如Fig. 5所示,ELISA检测结果显示该双抗亲和活性良好。

Fig. 5 某双抗项目亲和活性测定


5.2 SEC-HPLC纯度分析

如Fig. 6所示,通过分子排阻色谱法测得目标双抗含量为97.73%,聚体含量为2.27%。

Fig. 6 某双抗项目SEC-HPLC纯度分析


5.3 还原CE-SDS纯度分析

如Fig. 7所示,还原毛细管电泳检测结果显示该双抗样品主峰比例为93.0%。


Fig. 7 某双抗项目还原CE-SDS纯度分析


5.4 非还原CE-SDS纯度分析

如Fig. 8所示,非还原毛细管电泳检测结果显示该双抗样品主峰比例为94.3%。


Fig. 8 某双抗项目非还原CE-SDS纯度分析


5.5 CEX电荷异质性分析

如Fig. 9所示,电荷异质性检测结果显示酸性区域色普峰面积32.8%,主峰色谱峰面积62.0%,碱性区域色 普峰面积5.2%。

Fig. 9 某双抗项目CEX电荷异质性分析