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技术背景
抗体药物具有高效、低毒、成功率较高的特性,至今已经有近100个药物上市广泛用于肿瘤、自身免疫、眼病等各个领域,特别是近年来以抗PD-1抗体为代表的免疫治疗展示出良好的药效为抗体药物开辟了新的篇章,然而,随着市场的竞争、政策的变化,围绕新靶点开发的创新型抗体药物成为了必然。

服务概括

dafabe888手机版登录是一家国际领先的、专注于创新抗体药物研发和服务的生物高技术企业,打造了从载体构建到小试工艺开发整个一体化的平台。 基于一体化创新技术平台,公司开发了一系列具有优异疗效的单抗和双抗药物,其中包括抗CLDN18.2 纳米抗体、抗PD-L1 纳米抗体、抗S1双特异中和抗体等30多个处于不同研发阶段的创新抗体药物。强大的抗体药物研发经验可以为客户提供从靶点至PCC的抗体药物研发整体解决方案。



服务亮点
  • 创新抗体药物发现一体化平台
    1. 从靶点到PCC的一体化平台。
  • 30+PCC研发经验
    1. 30余特色创新分子可应用于联合或者双抗概念测试服务。
  • 300+创新靶点的探索性研发
    1. 潜在成药性靶点提前研发到各个阶段,可大大缩短客户研发时间和风险。
  • 200+抗体药研发专业团队
    1. 经验丰富的团队快速解决问题。
  • 300+客户合作成功案例
    1. 众多的成功项目夯实了技术平台。
  • 无限灵活个性化定制商务模式
    1. 以项目成功为导向,合作更为灵活。

服务特性

dafabet黄金手机版的临床前创新抗体药物发现一体化平台涵盖6个功能模块、25个技术平台,可为客户提供从抗原制备、抗体产生、体外功能、抗体工程到动物药效的抗体药发现整体服务。




案例展示
客户案例 (300+ 客户成功合作)

截止2021年12月,dafabet黄金手机版已为300余家抗体药研发公司提供了各类研发服务。


客户包括恒瑞医药、华东医药、复星医药、海正药业、鲁南制药等中国制药工业百强企业,天境生物、来凯医药、 宝船生物、明慧医药、华博生物、创响生物、复星凯特等新兴创新生物药研发企业,以及Triumvira 、Alamab、 mAbTree等欧美药物研发公司。


2017年以来,客户二次合作率超过了80%。


dafabe888手机版登录专注于围绕噬菌体展示抗体库和抗体工程进行突破创新,主要的业务形式是创新抗体药物研发技术服务、项目服务、合作开发、项目孵化后授权转让。

商务模式

1、项目合作

2、外包服务

3、项目转让

4、专利授权

5、平台授权

6、技术引进

可选服务 (创新靶点的定向探索性研发)

300+靶点提前研发,目前在抗体药物早期研发的各个阶段,可大大缩短客户研发时间和风险。


案例1 SY11—抗X2靶点纳米抗体的开发

1. X靶点是胃癌的潜力靶点

人胃癌发病率高、早诊率低、死亡率靠前,相关治疗药物的开发迫在眉睫。蛋白X是构成紧密连接结构的一种膜 蛋白,具有四次跨膜结构;其两个剪切变体X1和X2的氨基酸序列一致性高达91%。70%的胃癌患者高表达X2, 且预后较差;X2蛋白仅特异性表达于胃上皮细胞,有望开发胃癌特异抗体药物。


2. 临床进展

目前仅一款抗-X2抗体药物处于三期临床,多个抗体进入临床。


3. 抗-X单抗的作用机制

抗-X单抗主要通过与肿瘤细胞表面的X蛋白结合,刺激激活抗体依 赖性细胞毒性(ADCC)和补体依赖性细胞毒性(CDC),还可以诱 导细胞凋亡和抑制细胞增殖。


Fig. 1 MOA of anti-X2 antibody


4. 抗X抗体关键结果

4.1 特异性、种属交叉活性测定

抗原特异性测定: 使用Human X2-HEK293T和Human X1-HEK293T细胞株进行流式测定,如图Fig. 2, 候选抗体和对照抗体均能够特异性结合Human X2而不结合Human X1。 


人鼠交叉活性测定: 使用Human X2-HEK293T和Mouse X2-HEK293细胞株进行流式测定,如图Fig. 2, 候选抗体和对照抗体均可以同时识别Human X2和Mouse X2,具有人鼠种属交叉活性。


Fig. 2 Specificity and human-rat cross-reactivity assay


4.2 结合活性测定

Human X2-HEK293T:Fig. 3A显示候选抗体与Human X2-HEK293T细胞的亲和力测定结果,其中C1的亲和力水平与对照抗体相当,其余抗体的亲和力水平优于对照抗体。


 Human X2- KATOIII: Fig. 3B显示候选抗体与Human X2- KATOIII细胞的亲和力测定结果,包括C2在内的大部分候选抗体的亲和力水平接近对照抗体。


Fig. 3 Binding affinity determination by FACS 


4.3 ADCC、CDC活性测定

候选抗体由于包含有IgG1 Fc片段,可以 ADCC和CDC效应对靶细胞进行杀伤。 


ADCC:如图Fig. 4A所示 , 候选抗体C1、 C2、C4对Human X2-HEK293T细胞的 ADCC杀伤效果均与对照抗体相当。如图 Fig. 4B, 候选抗体C1、C2和C4对Human X2- KATOIII的ADCC杀伤效果均显著优 于对照抗体。 


Fig. 4 ADCC assay (A: Human X2-HEK293T; B: Human X2- KATOIII)


CDC:如图Fig. 5A所示 , 候选抗体C1、C4 对Human X2-HEK293T细胞的CDC杀伤 效果优于对照抗体,C2的效果则与对照 抗体相当。如图Fig. 5B , 候选抗体C1、C2 和C4对Human X2- KATOIII的CDC杀伤 效果均显著优于对照抗体。


Fig. 5 CDC assay (A: Human X2-HEK293T; B: Human X2- KATOIII)


4.4 內吞活性测定

毒素分子可以通过抗体介导的内吞作用进入细胞,抑制细胞生长 。如图Fig.6所 示,靶细胞经候选抗体( C1,C2,C4)处理后,通过LDH法检测,发现Human X2-HEK293T细胞生长均受到明显抑制,表明这三个候选抗体均具有良好的内吞活性。


Fig. 6 Internalization assay on Human X2-HEK293T cell


4.5 动物模型药效评价

候选分子C2在SCID小鼠CDX模型的体内抗肿瘤药效验证结果如Fig. 7所示。小鼠分为对照组和治疗组,每周给药两次,连续给药三周。结果显示:候选抗体在与对照抗体等摩尔浓度剂量下,基本可以完全抑制肿瘤的生长。


    

Fig. 7 Tumor growth inhibition


5. 总结

dafabe888手机版登录通过羊驼免疫库筛选得到anti-X2 sdAb (C2) ,后与IgG1 FC融合,得到一个体内外药效显著的候选分 子。该嵌合抗体不结合X1蛋白;能够激活ADCC和CDC效应,而且偶联后较好的的细胞毒性效应;动物模型实验 证明该抗体能够抑制肿瘤生长;体内外药效与对照抗体相当,甚至更优。 


Anti-X2 sdAb (C2)属于单域抗体,可以开发成单抗、ADC、CAR-T和双特异性抗体等药物形式或创新疗法,用于胃癌、胰腺癌等疾病的免疫治疗。

案例2 SYCoVY—抗病毒Y人源化抗体的开发

1. 病毒Y

病毒Y感染引起的严重急性呼吸综合征的持续大流行在全球引发 了前所未有的公共卫生危机。截止2021年4月15日,根据世界卫生 组织的数据,全世界已确Z诊病例超过1.37亿,其中已有超296万人死亡。 


病毒Y是一种有包膜的正义单链RNA病毒, 依靠其包膜蛋白Spike(S)的受体结合域(RBD)与宿主细胞受体血管紧张素I转化酶2( ACE2)结合作为侵染的第一步,S蛋白发生剧烈构象变化,使病毒膜与宿主细胞膜融合,从而将病毒RNA释放至细胞内部,然后在细胞内部完成病毒蛋白的翻译、RNA的复制、病 毒颗粒的组装,最后成熟释放至细胞外部,形成完整的生命周期。作为侵染的第一步,S蛋白是目前治疗性中和 抗体开发的最重要的靶点。 



2. 临床竞争格局

截止2021年4月15日,针对病毒Y感染的治疗性中和抗体已经有23个抗体在临床阶段,而且再生元和礼来开发的抗体药物鸡尾酒疗法被紧急批准使用,尽管如此,目前的中和抗仍然存在很多问题。 


3. 中和抗体MOA

抗体通过结合病毒Y S蛋白的RBD区域,从而阻断其和宿主受体ACE2的结合,进而抑制病毒入侵宿主。 


4. 抗病毒Y抗体关键结果

4.1 FACS阻断活性测定

抗体通过阻断S蛋白和受体ACE2结合进而阻断病毒入侵细胞。本实 验通过采用不同浓度的抗体阻断RBD-mFc结合Vero E6细胞,其中 采用天然表达ACE2的Vero E6,其属于绿猴肾细胞系,而绿猴ACE2与人ACE2非常保守,序列同源性达到95%,因此其被常用于评价病 毒Y对人体的感染。结如果Fig. 8所示,抗体P17呈现浓度梯度依赖的 阻断效果,IC50达到0.89 nM。

Fig. 8 Cell based blocking of RBD-mFc binding on Vero cells by antibody P17


4.2 亲和力测定

候选分子采用Fortebio BLItz仪器进行亲和力测定。 首先采用抗原S蛋 白RBD-His进行结合300 s, 在10×KB缓冲液中平衡30 s后,将结合有 抗原的传感器转移至不同浓度抗体稀释液中结合300 s,待信号稳定后, 再转移到10×KB缓冲液中,解离时间为900 s,最后通过不同浓度抗体 的结合解离数据拟合得到KD、Kon和Koff。结果如Fig. 9所示,候选抗体 P17和RBD-his具有非常强的亲和力,亲和力达到了0.096 nM。

Fig. 9 Affinity analysis of the binding of antibody P17 to Virus Y RBD


4.3 假病毒中和活性测定

抗体通过阻断S蛋白和受体ACE2结合进而阻断病毒入侵细胞,包括假病毒。本实验中采用Huh7细胞,假病毒通过病毒Y S蛋白结合 细胞上的ACE2蛋白入侵宿主,在病毒增殖的过程中同时表达Luciferase荧光素酶,通过测定酶活进而测定不同浓度抗体对病毒 的入侵抑制。结果如Fig. 10显示,抗体P17随着浓度增加,假病毒呈 现浓度梯度依赖的增殖阻断效果,IC50为0.165 nM。

Fig. 10 Pseudo-virus neutralization test (PSV) of P17 in Huh7 cells


4.4 真病毒中和活性测定

抗体通过阻断S蛋白和受体ACE2结合进而阻断病毒入侵细胞,包括真病毒。本实验使用PRNT方法(噬斑减少中和试验),实验中使用梯度稀释的抗体和病毒Y孵育,然后侵染单层Vero细胞,接着使用固体琼脂糖凝胶铺于细胞上层。孵育一段时间后,加入中性红染料,因为活细胞能被染上颜色,而感染病毒发生病变的细胞不被染色,形成白 色的斑块,因此通过白斑的数量便可推算不同浓度抗体对病毒的中和抑制效果。结果如Fig. 11所示,白斑数量随着抗体P17浓度增加而递减,增殖阻断IC50为0.195 nM。 


Fig. 11 In vitro neutralization activity of P17 against Virus Y PRNT in Vero cells


4.5 体内药效测定

尽管在体外证明抗体能够有效的抑制病毒入侵细胞,然而生物体内更加复杂,因此需要在动物体内证明抗体依然能 够有效抑制病毒的增殖。本实验在病毒感染huACE2人源化小鼠4小时后,使用20 mg/kg抗体进行腹腔给药一次(单 药或联合), 在病毒感染3天后,取肺部和喉管组织并抽取RNA,通过RT-PCR测定病毒感染的滴度,从而推测抗体在 体内的病毒抑制效果。结果如Fig. 12所示,抗体单独或者联合给药后,病毒在肺部(Fig. 12A)以及喉管(Fig. 12B)的病 毒载量大幅度降低,说明抗体P17在动物体内具有较强的病毒抑制活性。

Fig. 12 In vitro therapeutic efficacy of P17 alone or cocktail in an established mouse model based on a Virus Y mouse adapted strain MASCp6 by RT-PCR. Virus titers of lung (Fig. 12A) and trachea (Fig. 12B)


5. 总结

dafabe888手机版登录通过超千亿人重组抗体库筛选得到抗病毒Y S蛋白RBD的抗体 ,从抗体筛选到动物药效评价耗时仅两个月,且显示出极好的体外病毒中和药效,而且在动物药效上也能够显著降低病毒在肺部和喉管等组织的病毒载量,目前药物已获IND批件,有望对病毒Y感染病人进行良好的治疗。