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技术背景

目前,已上市的单克隆抗体药物主要有以下几种形式,分别是:鼠源抗体、 人鼠嵌合抗体、人源化 抗体、全人源抗体。快速获得鼠源抗体可以助力人鼠嵌合抗体和人源化抗体的获得,从而加速抗 体药的生产上市,故小鼠免疫也不失为一种可选择的重要的抗体获得方式。然而,杂交瘤抗体制 备耗时周期长,克隆数量少,不能实现工业化生产。


为了获得数量更多、质量更优的候选抗体,dafabet黄金手机版隆重推出磁阵列免疫抗体库。


磁阵列免疫抗体库( MIT,Magnetic & Immunization & Tandem antibody library)是采用小鼠免 疫、阵列化噬菌体抗体库建库与磁珠高通量筛选技术相结合的抗体制备方法。截止2021年2月, dafabet黄金手机版已累计构建574个MIT免疫库,累计库容达到1.47x1011。dafabet黄金手机版MIT免疫库已累计服务60余个 项目,共计获得1500个优质候选分子。



服务亮点
  • 抗体序列明确,无后顾之忧
    1. 本产品采用基因工程和噬菌体展示技术,可直接获得抗体的基因序列。
  • 抢占市场先机,较杂交瘤节省3个月
    1. 本产品在建库和筛选环节仅需2个月,和杂交瘤技术的筛选环节相比,时间缩短了近3个月!
  • 交付几十至数百个先导抗体分子
    1. 采用多组建库方法及多种类筛库策略,单一靶点可获得数十至上百个候选分子。
  • 较杂交瘤具有更高亲和力,更利功能筛选
    1. 本产品获得的候选分子,比杂交瘤源的候选分子亲和力更高,更有利于后期的功能筛选及动物实验。
  • 多点多种类免疫,更易获得人猴交叉活性的抗体分子
    1. 本产品选择多品系小鼠,多种类免疫方法,多种类、多种属免疫原交叉免疫,易获得有人、猴交叉活性
      的候选分子。

服务特性
1.先导抗体数量

从MIT磁阵列免疫抗体库可以获得的抗体克隆数量 较多 。通过12个靶点对MIT库进行了筛选验证,共 获得了637个具有独特序列的抗体克隆,如 Fig. 1 所示,所得克隆数中位值是55个。


Fig. 1 Antibody number per project

2.所获抗体亲和力更高

从MIT磁阵列免疫抗体库获得的抗体分子亲和力通常 可达到pM水平。Fig. 2和Fig. 3中的抗体来自两个不同 的项目,由图可知,这两个项目均可获得多个亲和力与 对照抗体相当或显著优于对照抗体的分子。Fig. 4显示 不同来源单克隆抗体亲和力的比较, MIT免疫库来源 的优选抗体克隆(B1, B3和C4)的亲和力显著高于从 杂交瘤来源的优选抗体JK系列。


Fig. 2 Affinity ranking of MIT-056


Fig. 3 Affinity Ranking of MIT-051

Fig. 4 Comparison of affinities(MIT vs Hybridoma)

3.细胞水平的结合、阻断活性分析

从MIT磁阵列免疫抗体库获得的抗体分子大多具有较好的细胞水平活性。Fig. 5展示了采用FACS分析抗体与细 胞表面蛋白结合活性的一个案例项目,Fig. 6展示使用FACS分析抗体对受体配体结合的阻断活性的一个案例。 由图可知,全部先导抗体分子均展现了优于对照抗体的结合活性和阻断活性。


Fig. 5 Binding affinity determination by FACS


Fig. 6 Blocking activity determination by FACS

4.体外药效验证

从MIT磁阵列免疫抗体库获得的抗体分子体外药效 优秀。在吞噬实验中,通过抗体阻断“别吃我”信号, 可以促进巨噬细胞对靶细胞的吞噬。如图Fig. 7所示, 通过FACS检测发现,经候选抗体(E4A)处理,巨噬细 胞对靶细胞(CCRF-CEM)的吞噬作用显著增强, 表明该候选抗体对“别吃我”信号通路有很好的阻 断活性。

Fig. 7 Phagocytosis of CCRF-CEM cells by macrophages

5.体内药效验证

从MIT磁阵列免疫抗体库获得的抗体分子体内药效 优秀。候选分子在NOD/SCID小鼠的CDX模型的体内 抗肿瘤药效验证结果如Fig. 8所示。分对照组和治疗 组,每周给药三次,连续给药三周。结果显示:候选抗 体E4的抗肿瘤效果显著优于对照抗体。


Fig. 8 Tumor growth inhibition


服务内容
服务名称 服务内容 客户提供 周期
MIT抗体筛选服务 靶点名称、或靶点抗原、或细胞株 >20个先导抗体分子 约4个月
MIT基础上的PCC 分子发现服务 靶点名称、或靶点抗原、或细胞株

1-2个在动物模型水

 优异的人源化抗体

7-8个月
鼠源抗体人源化

鼠源抗体序列、靶点蛋白和对照 抗体、

鉴定用细胞株等

人源化序列、蛋白、 

质粒、检测报告

4-6周


附加服务
子服务1:小鼠免疫服务

经过多年技术积累,小鼠免疫平台现已开发出了应用四种品系的小鼠,三种佐剂,五种抗原组合以及两种免疫流程的阵列化免疫方式,能一次性覆盖所有免疫方法,极大的提升所得先导分子的数量和多样性,有利于获得有人猴交叉或人鼠交叉活性的分子。


多样化小鼠免疫方式

多种品系小鼠免疫: Balb/c,C57BL/6,MRL。 多种免疫方案:根据抗原特性进行皮下多点、多途径(抗原或细胞)、多种属(人鼠猴等)免疫原交叉免疫。


小鼠免疫流程

服务案例

小鼠免疫后的血清都有较好的效价。通过抗原或者细胞来免疫小鼠来获得针对目标抗原的抗体,由Fig. 9和 Fig. 10可以看出经过经过免疫后的小鼠血清相对于未免疫的小鼠,对于靶标抗原有很好的结合,如细胞免 疫最高的MFI值可以达到10万多。dafabe888手机版登录使用维通利华的动物饲养服务,配有先进的SPF/Elite级动物房以 及管理体系,如Fig. 11所示。


Fig. 10 The titration of project-01 by cell and cell & antigen


Fig. 11 The titration of project-01 by cell and cell & antigen


Fig. 12 The titration of project-01 by cell and cell & antigen


服务内容

服务名称 服务内容 客户提供 周期
MIT抗体筛选服务 靶点名称、或靶点抗原、或细胞株 >20个先导抗体分子 约4个月
MIT基础上的PCC 分子发现服务 靶点名称、或靶点抗原、或细胞株 1-2个在动物模型水平 优异的人源化抗体 7-8个月
鼠源抗体人源化 鼠源抗体序列、靶点蛋白和对照 抗体、鉴定用细胞株等 人源化序列、蛋白、 质粒、检测报告 4-6周


子服务2:小鼠免疫库构建服务

小鼠免疫库构建服务是通过构建高质量的鼠源Fab抗体噬菌体展示文库来获得高质量的单克隆抗体,免疫抗体库 的抗体基因来源于经抗原免疫的个体,因此不需要很大的库容量即可从该类抗体库中筛选到针对某一抗原的特异性抗体。


小鼠免疫库VS 杂交瘤




服务案例

截止2021年2月,dafabet黄金手机版已累计构建574个MIT免疫库,累计库容达到1.4x1011。Fig. 12所示,近3年来我司累计构建 的子库数量逐年递增,2020年增长率达到230.9%。免疫库已经成为筛选先导分子最常用,筛选效率最高的抗体库 类型。通过12个靶点对MIT库进行了筛选验证,共获得了637个具有独特序列的抗体克隆,如Fig. 13所示,所得克 隆数中位值是55个。


Fig. 12 Construction number of mouse immune sub-library


Fig. 13 Antibody number per project


服务内容

服务名称 服务内容 客户提供 交付物及标准 周期
小鼠免疫 抗体库构建

小鼠脾脏、其他组织,

 杂交瘤细胞或者RNA

小鼠免疫库构建报告

以及构建好的抗体库

2周